클론 분리
일반적으로, 클로닝은 하나의 특정 유전자 또는 관심있는 DNA 서열의 클론을 얻기 위해 수행된다. 따라서 복제 후 다음 단계는 라이브러리의 다른 구성원간에 해당 복제를 찾아 분리하는 것입니다. 라이브러리가 유기체의 전체 게놈을 포함하는 경우, 라이브러리 내의 어딘가에 원하는 클론이있을 것입니다. 관련된 특정 유전자에 따라 여러 가지 방법으로 찾을 수 있습니다. 가장 일반적으로, 찾은 유전자와 상 동성을 나타내는 복제 된 DNA 세그먼트가 프로브로 사용됩니다. 예를 들어, 마우스 유전자가 이미 클로닝 된 경우, 그 클론을 사용하여 인간 게놈 라이브러리에서 동등한 인간 클론을 찾을 수 있습니다. 도서관을 구성하는 박테리아 식민지는 페트리 접시 모음에서 자랍니다. 그런 다음 다공성 막을 각 판의 표면에 놓고 세포가 막에 부착됩니다. 세포가 파열되고 DNA가 막에서 단일 가닥으로 분리됩니다. 프로브는 또한 단일 가닥으로 분리되고 종종 방사성 인으로 표지됩니다. 이어서, 방사성 프로브의 용액을 사용하여 막을 입욕시킨다. 단일 가닥 프로브 DNA는 동등한 유전자를 함유하는 클론의 DNA에만 부착 될 것이다. 막을 건조시키고 한 장의 감 방사선 성 필름에 대고 배치하고, 필름 어딘가에 원하는 클론의 존재 및 위치를 알리는 검은 점이 나타날 것이다. 그런 다음 복제본을 원래 페트리 디쉬에서 검색 할 수 있습니다.
유전학: 재조합 DNA 기술 및 중합 효소 연쇄 반응
기술 발전은 유전 적 이해의 발전에 중요한 역할을했습니다. 1970 년 미국 미생물 학자 다니엘 나 단스
DNA 시퀀싱
일단 DNA 세그먼트가 클로닝되면, 이의 뉴클레오타이드 서열이 결정될 수있다. 뉴클레오티드 서열은 유전자 또는 게놈에 대한 가장 기본적인 지식 수준입니다. 유기체를 구축하기위한 지시 사항을 포함하는 청사진이며,이 정보를 얻지 않고서는 유전자 기능이나 진화에 대한 이해가 불가능합니다.
용도
DNA 세그먼트의 서열에 대한 지식은 많은 용도가 있으며, 일부 예가 이어진다. 먼저, 특정 단백질 또는 표현형을 코딩하는 유전자, DNA 세그먼트를 찾는 데 사용될 수 있습니다. DNA의 영역이 시퀀싱 된 경우, 유전자의 특징적인 특징을 선별 할 수 있습니다. 예를 들어, 오픈 코딩 프레임 (ORF) — 시작 코돈 (세 개의 인접한 뉴클레오티드로 시작하고 코돈의 서열은 아미노산 생산을 지시 함)으로 시작하고 정지 코돈에 의해 중단되지 않는 긴 서열 (종료시 하나 제외) — 단백질 코딩 영역. 또한, 인간 유전자는 일반적으로 소위 CpG 섬 (사이토 신 및 구아닌의 클러스터, DNA를 구성하는 두 개의 뉴클레오티드)에 인접 해 있습니다. 알려진 표현형을 가진 유전자 (예: 인간의 질병 유전자)가 염색체 영역에있는 것으로 알려진 경우, 해당 영역에서 할당되지 않은 유전자가 해당 기능의 후보가됩니다. 둘째, 종 내에서 종 사이의 진화 관계를 나타 내기 위해 다른 유기체의 상 동성 DNA 서열을 비교할 수있다. 셋째, 기능적 영역에 대해 유전자 서열을 스크리닝 할 수있다. 유전자의 기능을 결정하기 위해, 유사한 기능의 단백질에 공통적 인 다양한 도메인이 식별 될 수있다. 예를 들어, 유전자 내의 특정 아미노산 서열은 항상 세포막에 걸쳐있는 단백질에서 발견되며; 이러한 아미노산 스트레치를 막 횡단 도메인이라한다. 막 통과 도메인이 알려지지 않은 기능의 유전자에서 발견되면, 암호화 된 단백질이 세포막에 위치 함을 시사한다. 다른 도메인은 DNA- 결합 단백질을 특징으로한다. 관심있는 개인이 분석 할 수 있도록 DNA 서열의 여러 공개 데이터베이스를 사용할 수 있습니다.
